Sbírka starého umění zahrnuje několik velkých sbírkových souborů: českou gotickou deskovou malbu prezentují např. díla Mistra vyšebrodského oltáře, Mistra Theodorika, Mistra třeboňského oltáře, gotické sochařství zastupují kromě jiných i práce Mistra Oplakávání ze Žebráku, Monogramisty IP. Barokní malířství představují obrazy K. Škréty, J. Kupeckého, V. V. Reinera a dalších, barokní sochařství plastiky F. Brokofa, M. B. Brauna a rudolfínské umění H. von Aachena, J. Heintze, B. Sprangera, A. de Vriese. Ve sbírce starého evropského umění je uložena významná kolekce italského umění 14. a 15. století, kterou reprezentují ucelené soubory florentského, sienského, benátského a severoitalského malířství. Malíře benátské školy zastupuje např. G. B. Tiepolo, tvorbu vrcholné renesance představují díla J. Tintoretta, A. Bronzina, El Greca. Flámské a holandské obrazy 17. století patří k nejpočetnějším souborům sbírky a jsou mezi nimi díla P. P. Rubense, A. van Dycka, Rembrandta, F. Halse a dalších.
